产品货号:
KD0559
中文名称:
β-半乳糖苷酶显示试剂盒
英文名称:
β-Galactosidase display Kit
产品规格:
50mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
保存:-20℃
储存条件:-20℃保存,有效期一年,其中Z buffer和β-ME常温保存。。
产品内容:
试剂和材料的准备:
Whatman 5#滤纸或Grade 410滤纸,灭菌处理;镊子,用来夹取滤纸;
液氮。
Z buffer/X-gal溶液:100mL Z buffer
0.27mL β-mercaptoethanol (β-ME)
1.67mL X-gal储存液(-20℃保存)
操作方法:
1.为了得到最好的结果,用新鲜的克隆(一般30℃培养2~4天),菌落直径1~3mm。
2.配制Z buffer/X-gal溶液。
3.预先将滤纸放在盛有2.5~5.0mL的Z buffer/X-gal溶液的培养皿中。
4.用镊子夹取一张干净、干燥的滤纸放在长有菌落的平板上,轻轻用镊子摩擦,帮助菌落附着在滤纸上。
5.透过滤纸,在三个不同的方位上穿孔(不对称的方位),此方法用于在培养基上确定滤纸的方向。
6.当滤纸均匀湿润后,用镊子小心将滤纸从培养基上取下,转移到液氮中,浸没在液氮中10秒。
7.取出液氮中冷冻过的滤纸,室温下融化。
8.小心将滤纸正面朝上,放在第三步预处理的滤纸上,避免在两层滤纸中间产生气泡。
9.将带有两层滤纸的培养皿放于30℃或室温下,定期检查蓝色菌落的出现情况。一般8小时之内变兰的可初步定位阳性克隆。
10.在平板上找到与蓝色菌落相对应的菌落,挑相应的蓝色菌落到新的培养基平板上。
方法改进:
先在一个培养皿中铺一张普通灭菌滤纸,再加2.5~5.0mL Z buffer/X-gal溶液将滤纸润湿;然后将显色滤纸(Whatman 5#滤纸或Grade 410滤纸)剪成长方形,放在培养皿中,加少量灭菌水润湿,用牙签挑取菌落轻轻在滤纸上划线,直接液氮冷冻10秒,取出室温融化,放在预先准备好的滤纸上,避免在两层滤纸间产生气泡。做好标记后,放在30℃或室温下,定期检查蓝色菌落的出现情况。一般8小时之内变蓝的可初步定位阳性克隆。
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